CCK-8增強性試劑盒

4℃儲存，避光保存兩年

產品概述

CCK8試劑盒（增強型）簡稱 CCK8 試劑盒，是一種基于 WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK8 工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映活細胞數量。

CCK8 是 MTT 的一種升級替代產品，和 MTT 或其它 MTT 類似產品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優點。首先，MTT 被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而 CCK8 和 XTT 、MTS 產生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，CCK8 產生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產生的 formazan 更易溶解。再次，CCK8 比 XTT 和 MTS 更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，CCK8 和 MTT、XTT 等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

CCK8 應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

使用方法

一、細胞活性檢測

注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

1. 在 96 孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（37℃，5% CO2）。

2. 向每孔加入 10 μL CCK8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。

3. 將培養板在培養箱內孵育 1 - 4 h。

4. 用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

5. 若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下，24 h 內測定，吸光度不會發生變化。

二、細胞增殖-毒性檢測

1. 在 96 孔板中配置 100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 h（37℃，5% CO2）。

2. 向培養板加入 1-10 μL 不同濃度的待測物質。

3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如： 6、12、24 或 48 h）。

4. 向每孔加入 10 μL CCK8 溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。

5. 將培養板在培養箱內孵育 1 - 4 h。

6. 用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

7. 若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24 h 內測定，吸光度不會發生變化。